DNA甲基化是基因表观遗传学修饰的一种重要方式，是指在DNA甲基化转移酶（DNMT）的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，将活性甲基转移至DNA链中特定碱基上的化学修饰过程。在哺乳动物中，DNA甲基化主要发生在胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤（CpG）岛5′端胞嘧啶上，生成为5′甲基胞嘧啶（5-methylcytosine, m5C）。

随着分子检测的不断发展，甲基化qPCR检测以及甲基化NGS检测已成为非常普及的检测技术，这两种技术的必经之路就是甲基化转化，甲基化转化从方法学上可分为亚硫酸氢盐转化和酶法转化，从技术路线上可分为正向转化和反向转化，他们的区别如下：

TAPS酶转化 

原理：通过氧化酶将5mC和5hmC氧化成5caC，然后在还原剂的作用下，转变成DHU，通过PCR，最终将5mC和5hmC转化成T。

特点：1. 对DNA破坏性小，可以保留10kb的DNA片段。2. 由于是将甲基化的C转变为T,因此对DNA序列的碱基平衡影响极小，下机数据质量提高，可同时检测基因突变。3.转化后可用普通建库试剂盒建库。

DM-seq酶转化

原理：利用DNA羧甲基转移酶(CxMTase)保护所有未修饰的C。葡糖基化酶保护所有5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)。A3A脱氨酶对5mC进行脱氨，通过PCR最终将5mC变成T。

特点：1、对DNA破坏性小。2、可区分5mC与5hmC，5mC转化为T，因此对DNA序列的碱基平衡影响极小，下机数据质量提高。

亚硫酸氢盐转化 

原理：利用 NaOH 和亚硫酸氢钠对 DNA 进行处理的化学反应，在该化学反应过程中，胞嘧啶碱基被转化为尿嘧啶 (U)，而甲基化的胞嘧啶则不会被转化。

特点：转化效率高，成为甲基化转化的金标准，但样本损伤较大。

EM-seq转化 

原理：氧化酶保护甲基化C和羟甲基化C ,脱氨酶转化非甲基化C，在该酶促反应过程中，胞嘧啶碱基被转化为尿嘧啶 (U)，而甲基化的胞嘧啶则不会被转化。

特点：转化效率高，样本损伤小，成本高。

自从2019年TAPS技术问世，一直备受深耕在甲基化领域的老师们关注，看似简单的原理，却一直没法实现高转化率，老师们也尝试过不同的TET酶，却效果甚微。翌圣借助ZymeEditor（点击蓝字了解更多）酶改造及发酵纯化工艺平台，对TET酶进行改造，及不断优化纯化工艺，沉淀4年，首家推出适配TAPS转化的酶，且转化率突破90%，领先行业水平。

EM-seq和TAPS在转化的第一步都用到TET酶，这两个酶是否可以共用呢？答案是：不能；因为TAPS TET需要更强的氧化能力，原理如下：

 图1 EM-seq和TAPS的氧化原理

产品介绍

Recombinant Ten-Eleven Translocase 2.0(TET2.0, with buffer)是翌圣生物开发的一款高效用于甲基化位点转化的单酶。可以将甲基化的胞嘧啶（5mC）高效的转化成5fC和5caC。

产品性能

1、TET2.0的氧化效率

293T gDNA 样本中掺入1% 甲基化pUC19 DNA，样本打断后分别以10ng和100ng进行TET酶氧化，再经还原剂还原，还原的产物采用磁珠（Cat#12601）进行纯化，对纯化产物进行建库和测序，分析pUC19 DNA 5mC被转化的情况, 结果显示：10ng样本投入量的氧化效率＞89%，100ng样本投入量的氧化效率＞90%。

图2 TET2.0氧化效率

2、样本完整度分析

取完整的gDNA，一组未处理，另一组经TET2.0酶氧化和还原剂还原，还原的产物采用磁珠（Cat#12601）进行纯化，对纯化产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果显示：TET酶处理组与未处理组条带大小几乎不变，说明TET酶对样本几乎没有损伤。

图3 TET2.0处理的样本完整度分析

3、TET2.0的稳定性分析

将TET 2.0在4℃放置14天或者冻融20次，然后与对照组一起进行甲基化转化和测序分析，如图所示：TET 2.0在4℃放置14天或者冻融20次，PUC19 5mC转化率几乎不受影响。

图4 TET2.0的稳定性分析

产品订购指南